Excel में qPCR डेटा का विश्लेषण कैसे करें (2 आसान तरीके)

qPCR एक परिष्कृत तकनीक है जिसका उपयोग DNA . की मात्रा को मापने के लिए किया जाता है PCR . का उपयोग करके नमूने में . qPCR मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन शब्द के लिए खड़ा है . हालांकि यह एक उन्नत प्रक्रिया है, हम विश्लेषण . कर सकते हैं qPCR एक्सेल में डेटा। इस लेख में, हम आपको दो . प्रदर्शित करेंगे qPCR का विश्लेषण करने के तरीके एक्सेल में डेटा। यदि आप उन्हें जानने के लिए उत्सुक हैं, तो हमारी अभ्यास कार्यपुस्तिका डाउनलोड करें और हमें फॉलो करें।

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qPCR विश्लेषण क्या है?

qPCR या मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन एक परिष्कृत तकनीक है जिसका उपयोग DNA . की मात्रा को मापने के लिए किया जाता है PCR (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) . का उपयोग करके नमूने में . qPCR डेटा का विश्लेषण करने के दो तरीके हैं।

डबल डेल्टा सीटी विधि

2001 में, लिवक और श्मिटजेन इस विश्लेषण प्रक्रिया को डबल डेल्टा सीटी . कहा जाता है तरीका। यह Pfaffl . का एक विशिष्ट मामला है तरीका। इस पद्धति के अनुसार, हमें दो . इनपुट करना होगा प्रयोगात्मक डेटा का औसत सेट (जीन परीक्षण प्रायोगिक और हाउसकीपिंग जीन प्रायोगिक ) और नियंत्रण डेटा (जीन परीक्षण नियंत्रण और हाउसकीपिंग जीन नियंत्रण ) इन मानों का उपयोग करके, हमें ∆CTE . के मान प्राप्त होंगे और ∆सीटीसी , क्रमशः।

∆CTE . का मान जीन परीक्षण प्रायोगिक (TE) . के कटौती मूल्य का प्रतिनिधित्व करता है और हाउसकीपिंग जीन एक्सपेरिमेंटल (HE) . ∆CTE . की सामान्य अभिव्यक्ति है:

इसी तरह, ∆CTC . का मान हाउसकीपिंग जीन कंट्रोल (HC) . के कटौती मूल्य के लिए खड़ा है जीन परीक्षण नियंत्रण (टीसी) . से . इस शब्द का गणितीय व्यंजक है:

उसके बाद, हमें ∆∆Ct . के मान का अनुमान लगाना होगा . ∆∆Ct . का मान निर्धारित करने का सूत्र है:

अंत में, हम जीन अभिव्यक्ति अनुपात . का मूल्यांकन करेंगे . इस पद्धति के अनुसार, हम प्राइमर दक्षता . मान लेते हैं प्रयोगात्मक और नियंत्रण दोनों जीनों के लिए 100% . है . इस प्रकार, जीन अभिव्यक्ति अनुपात . की अभिव्यक्ति है:

Pfaffl विधि

Pfaffl विधि qPCR . के लिए एक सामान्य विधि है विश्लेषण। इस पद्धति में डबल डेल्टा सीटी . के साथ समानताएं हैं तरीका। हालांकि, प्राइमर क्षमताएं इस पद्धति में मान 100% नहीं है . यह कोई भी संख्या हो सकती है। आमतौर पर, यह मान 90% . के बीच रहता है से 110% दोनों के लिए हाउस कीपिंग जीन (HKG) और जीन ऑफ इंटरेस्ट (जीओआई) . 2001 में, माइकल पफ्फल न्यूक्लिक एसिड अनुसंधान . में इस विश्लेषण सूत्र की पेशकश की पत्रिका.

इस दृष्टिकोण में, हमें डेटा के दो सेट इनपुट करने होंगे। इस डेटा का उपयोग करके, हम उनके औसत मूल्य की गणना करते हैं। फिर, हम नियंत्रण नमूनों के औसत का अनुमान लगाते हैं। इससे हम ∆Ct . का मान निर्धारित करेंगे . ∆Ct . की अभिव्यक्ति है:

इसके अलावा, जीन अभिव्यक्ति अनुपात . का विश्लेषण करने के लिए गणितीय सूत्र है:

Excel में qPCR डेटा का विश्लेषण करने के 2 आसान तरीके

इस प्रतियोगिता में, हम qPCR . का विश्लेषण करने जा रहे हैं तीन . के लिए डेटा या पांच डेटा के नमूने। हम सबसे पहले डबल डेल्टा सीटी . के लिए विश्लेषण करेंगे विधि और फिर हम Pfaffl विधि का प्रदर्शन करेंगे ।

qPCR . का विश्लेषण करने के लिए डबल डेल्टा सीटी . के माध्यम से डेटा विधि, हम पांच . के डेटासेट पर विचार करते हैं डीएनए नमूने। इस पद्धति में, हमें पीसीआर प्राइमर क्षमता . के मूल्य पर विचार करना होगा प्रायोगिक जीन और नियंत्रण जीन दोनों के लिए 100% . है . हम यह भी दावा कर सकते हैं कि यह Pfaffl पद्धति का एक विशिष्ट मामला है। चरणों का विश्लेषण इस प्रकार किया जाएगा:

📌 चरण:

• सबसे पहले, छवि में दिखाए गए अनुसार सभी जीन मानों को सटीक रूप से इनपुट करें। हमें जीन परीक्षित प्रायोगिक (TE) . के सभी प्रयोगात्मक मूल्यों को इनपुट करना होगा और हाउसकीपिंग जीन एक्सपेरिमेंटल (HE) कॉलम में B और सी इसी तरह, जीन परीक्षण नियंत्रण (टीसी) . के सभी नियंत्रण मूल्यों को इनपुट करें और हाउसकीपिंग जीन कंट्रोल (एचसी) कॉलम में D और ई क्रमशः।

• अब, सेल में F5 , ∆CTE . के मान की गणना करने के लिए , निम्न सूत्र लिखिए।

=B6-C6

• दर्ज करें दबाएं ।

• इसी प्रकार, ∆CTC . के मूल्य का अनुमान लगाने के लिए , सेल G5 . में निम्न सूत्र लिखिए ।

=D6-E6

• फिर से, दर्ज करें दबाएं ।

• फिर, सेल चुनें H5 और ∆∆Ct . का मान प्राप्त करने के लिए निम्न सूत्र लिखिए ।

=F6-G6

• दर्ज करें दबाएं ।

• आखिरकार, जीन अभिव्यक्ति अनुपात के मान की गणना करने के लिए या 2^(−∆∆Ct) , सेल I5 . में निम्न सूत्र लिखिए ।

=2^(-H6)

• दर्ज करें दबाएं आखिरी बार।

• उसके बाद, सेल की श्रेणी चुनें F6:I6 ।

• डबल-क्लिक करें हैंडल भरें . पर सूत्र को कॉपी करने के लिए आइकन 10 ।
• आपको जीन अभिव्यक्ति अनुपात के मान मिलेंगे प्रत्येक नमूने के लिए।

इस प्रकार, हम कह सकते हैं कि हमारी पद्धति ने पूरी तरह से काम किया, और हम qPCR . का विश्लेषण करने में सक्षम हैं एक्सेल में डेटा।

🔍 परिणाम की व्याख्या

जीन अभिव्यक्ति अनुपात . का मान का 0.6507 सेल में I5 मतलब परीक्षित स्थितियों . में जीन के नमूने नियंत्रण शर्तों . के संबंध में सभी को हमारे हाउसकीपिंग जीन के लिए सामान्य कर दिया गया है। इसके अलावा, आप इसे प्रतिशत अवधि में मान सकते हैं। 0.6507 मतलब 65.07% हमारी परीक्षित स्थिति . में जीन अभिव्यक्ति हमारी नियंत्रण स्थिति . के साथ ।

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इस दृष्टिकोण में, हम Pfaffl विधि . का उपयोग करेंगे . डबल डेल्टा सीटी . के साथ इस पद्धति के बीच मुख्य अंतर विधि पीसीआर प्राइमर क्षमता . के मूल्य में है प्रयोगात्मक जीन और नियंत्रण जीन दोनों के लिए जो 100% . नहीं हैं . इस उदाहरण में, हम मानेंगे कि प्राइमर दक्षता दोनों मामलों के लिए मूल्य। हाउस कीपिंग जीन . के लिए नमूना, हम प्राइमर दक्षता . का मान मान रहे हैं 93% है , जबकि रुचि के जीन . के लिए यह मान 101% होगा। इस विधि के चरण नीचे दिए गए हैं:

📌 चरण:

• सबसे पहले, सभी जीन मानों को सटीक रूप से इनपुट करें, जैसा कि चित्र में दिखाया गया है। हमें इलाज . के सभी दो सेटों को इनपुट करना होगा और नियंत्रण हाउस कीपिंग जीन (HKG) . के जीन मान और जीन ऑफ इंटरेस्ट (जीओआई) . दोनों जीन सेट Ct-1 . के रूप में दर्शाए गए हैं और सीटी-2 क्रमशः।

• सबसे पहले, हम हाउस कीपिंग जीन (HKG)  के लिए सभी गणनाएं पूरी करेंगे अनुभाग।
• अब, हम दोनों सेटों का माध्य मान लेंगे। उसके लिए, हम औसत फ़ंक्शन का उपयोग करने जा रहे हैं .
• निम्न सूत्र को E6 सेल में लिख लें ।

=AVERAGE(C6:D6)

• दर्ज करें दबाएं ।

• फिर, डबल-क्लिक करें हैंडल भरें . पर E11 . तक सूत्र को कॉपी करने के लिए आइकन ।

• उसके बाद, हमें तीन . के औसत का अनुमान लगाना होगा मूल्यों को नियंत्रित करें।
• उसके लिए, निम्न सूत्र को मर्ज किए गए F6 में लिख लें

=AVERAGE(E9:E11)

• दर्ज करें दबाएं ।

• अब, सेल चुनें G6 और ∆Ct . का मान प्राप्त करने के लिए निम्न सूत्र लिखिए . सुनिश्चित करें कि आपने एब्सोल्यूट सेल संदर्भ . इनपुट किया है सेल के लिए F6 ।

=E6-$F$6

• फिर से, दर्ज करें दबाएं ।

• फिर, डबल-क्लिक करें हैंडल भरें . पर सेल G11 . तक सूत्र को कॉपी करने के लिए आइकन ।
• हाउस कीपिंग जीन (HKG) के लिए हमारी सभी गणनाएं समाप्त हो गए हैं।

• इसी तरह, इसी प्रक्रिया का पालन करते हुए रुचि के जीन (GOI)  के लिए सभी गणनाएं पूरी करें अनुभाग।

• आखिरकार, सेल में O6 , व्यंजक अनुपात का मान प्राप्त करने के लिए निम्न सूत्र लिखिए। सुनिश्चित करें कि पूर्ण सेल संदर्भ कोशिकाओं के लिए N6 और H6 ।

=($N$6^M6)/($H$6^G6)

• दर्ज करें दबाएं आखिरी बार।

• अब, डबल-क्लिक करें हैंडल भरें . पर सेल O11 . तक सूत्र को कॉपी करने के लिए आइकन ।
• आपको प्रत्येक नमूने के लिए व्यंजक अनुपात का मान प्राप्त होगा।

इसलिए, हम कह सकते हैं कि हमारी पद्धति ने सफलतापूर्वक काम किया, और हम qPCR . का विश्लेषण करने में सक्षम हैं एक्सेल में डेटा।

निष्कर्ष

यही इस लेख का अंत है। मुझे आशा है कि यह लेख आपके लिए सहायक होगा और आप qPCR . का विश्लेषण करने में सक्षम होंगे एक्सेल में डेटा। यदि आपके कोई और प्रश्न या सिफारिशें हैं तो कृपया नीचे टिप्पणी अनुभाग में हमारे साथ कोई और प्रश्न या सिफारिशें साझा करें।

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